期刊简介
本刊综述国内外最新生理科学研究动态及进展；报道有价值的实验结果和先进的实验方法；介绍医学教学的经验方法；探索教学改革的思路，评价新药在临床使用情况，指导临床安全合理用药，加强会员之间的交流与提高。
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- 杂志名称：四川生理科学杂志
- 主管单位：四川省科学技术协会
- 主办单位：四川省生理科学会
- 国际刊号：1671-3885
- 国内刊号：51-1160/R
- 出版周期：季刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中)
可诱导稳定表达大电导钙激活钾通道的细胞系构建及蛋白质纯化
毛亮；程俊；黄文俊；谭晓秋；党喜同；曾晓荣；杨艳
关键词：稳定表达细胞系, BKCa重组蛋白质, 膜片钳
摘要：目的:旨在构建稳定表达人大电导钙激活钾通道(BKCa)的稳定细胞系并对重组蛋白分离纯化.方法:利用基因工程技术将人肠系膜动脉平滑肌BKCa编码基因克隆到表达载体pcDNA5/FRT/TO/FLAG,并转染Flp-InTMT-RExTM-293宿主细胞,用潮霉素B筛选建立稳定表达的单克隆细胞系.BKCa-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后,用anti-FLAG抗体对表达的BKCa蛋白质进行纯化.用western blot检测BKCa通道蛋白质的表达,用单通道膜片钳检测通道的电生理特性.结果:BKCa-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后表达了高水平的BKCa-FLAG融合蛋白,BKCa通道电导值为213.39±9.52 pS(n=15,cell-attached)和225.72±10.61 pS(n=13,inside-out),BKCa通道具有典型的大电导特性、电压依赖性、Ca2+依赖性及IbTX敏感性,与在体的人肠系膜动脉平滑肌BKCa通道具有相同的特征.纯化后的BKCa蛋白质条带单一,纯度约为89%.结论:成功构建BKCa-pcDNA5-293细胞系并获得纯化的BKCa蛋白质,为进一步深入研究通道功能及药物筛选奠定了重要的基础.
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